RIPA lysis buffer (strong) RIPA裂解液(强)

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

RIPA lysis buffer (strong) RIPA裂解液(强)

20101ES60

100 mL

228.00


产品描述

RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer),其本意是Radio Immunoprecipitation Assay,是一种传统的细胞组织快速裂解液,对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。根据其裂解液的强度不同,大致可以分为强、中、弱三类。

本品为裂解强度相对较强的RIPA裂解液(强),含有sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP等实验。


运输与保存方法

冰袋(wet ice)运输。-20℃保存,一年有效。尽量避免反复冻融,建议分装后使用。


注意事项

1)需自备PMSF。

2)裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

3) 用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度(Cat NO.20201ES76)。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

4)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。


使用说明:

培养细胞样品

1. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的终浓度为1 mM。

2. 贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。细胞充分裂解后应无没有明显的细胞沉淀。

悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成0.5-1×106个细胞/管,然后再裂解。

3. 充分裂解后,10000-14000 g离心3-5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150 μL裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200 μL或250 μL。


组织样品

1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的终浓度为1 mM。

3. 按照每20 mg组织加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)

4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。

5. 充分裂解后,10000-14000 g离心3-5 min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。

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