2× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真酶预混液

产品信息


产品名称

产品编号

规格

价格(元)

2× Hieff Canace® PCR Master Mix  高保真酶预混液

10136ES01

100 μL

86.00

2× Hieff Canace® PCR Master Mix  高保真酶预混液

10136ES03

1 mL

526.00

2× Hieff Canace® PCR Master Mix  高保真酶预混液

10136ES08

5×1 mL

1426.00

2× Hieff Canace® PCR Master Mix  高保真酶预混液

10136ES25

25×1 mL

5626.00


产品描述

2× Hieff Canace® PCR Master Mix是即用型2×预混合溶液,包含Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase,dNTP以及优化的缓冲体系。Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶,具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性,其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍,是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。扩增速度可达15 sec/kb。适用于复杂模板的扩增,扩增产物为平末端。

2× Hieff Canace® PCR Master Mix具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,反应体系只需加入引物和模板即可进行扩增,简化了实验操作步骤,减少了人为误差,提高了实验通量和结果的重复性。本产品中不含染料,PCR产物需加入Loading buffer 后进行电泳。另外,该产品还含有特异保护剂,使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。

产品应用

基因克隆;复杂DNA模板扩增;高通量建库。

质量控制

核酸外切酶残留检测:20 μL本品和0.6 μg λDNA -Hind Ⅲ,37℃下孵育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

核酸内切酶残留检测:20 μL本品和1 μg λDNA,37℃温育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

大肠杆菌残留DNA检测:50 μL体系中,加入25 μL本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1%琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。


运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。


注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


推荐PCR反应体系(冰上配制)

组分

体积

终浓度

ddH2O

to 50 μL

-

DNA模板

适量

-

Primer正向 (10 μM)

2.5 μL

0.5 μM

Primer反向 (10 μM)

2.5 μL

0.5 μM

2× Hieff Canace® PCR Master Mix

25 μL

【注】: 1)聚合酶终浓度在1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶。

2)引物PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM,推荐0.5 μM。

3)Mg2+dNTP终浓度在1×预混液含有1.5 mM Mg2+和200 μM的dNTP。

4)高GC模板:在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。

5)不同模板的推荐使用量(50 μL反应体系):

模板种类

扩增片段1 kb-20 kb

基因组DNA

50 ng-200 ng

质粒或病毒DNA

10 pg-20 ng

cDNA

1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10)

PCR扩增程序设置

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

98℃

0.5-3 min

1

变性

98℃

10 sec

30-35

退火

60℃

20 sec

延伸

72℃

15-30 sec/kb

终延伸

72℃

5 min

1

【注】:1)预变性温度和时间:推荐使用98℃。预变性推荐时间:质粒DNA等简单模板为30 sec;cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min;高GC含量模板为5-10 min。

2)退火温度和时间:推荐使用60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

3)延伸温度和时间:推荐使用72℃。延伸时间推荐如下:质粒DNA等简单模板为15 sec/kb;cDNA、基因组DNA等复杂模板为30 sec/kb,根据实际情况可延长至40 sec/kb。

4)扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20℃保存,防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端,产物直接用于克隆,请使用平末端连接载体。

应用实例

image.png 

图1: Hieff Canace® 高保真PCR预混液扩增2.1 kb-6 kb目的片段。所有基因片段均可实现高特异性、高产量扩增。模板:拟南芥基因组DNA,50 ng/50 μL;退火温度:60℃;延伸时间:30 sec/kb。M:1 kb ladder; 1:2.1 kb;2:3.1 kb;3:4.2 kb;4:kb;5:kb。

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