Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase 高保真DNA聚合酶

产品信息

产品名称

产品编号

规格

价格(元)

Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase  高保真DNA聚合酶

10135ES10

10 U

96.00

10135ES60

100 U

626.00

10135ES76

500 U

2356.00

10135ES80

1000 U

4256.00


产品描述

Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶。该酶基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase,经基因工程改造而成。其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和经过改造的3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性,保真性。耐热温度达到98℃,保真性是Taq DNA聚合酶的52倍,普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了独特的延伸因子,扩增速度达到15 sec/kb。本产品配备了优化后的酶缓冲液,添加了PCR增强组分,使得该酶具有极强的扩增效率和广泛的模板适应性,非常适合复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。


产品组分


编号

组分

产品编码/规格

10135ES10

(10 U)

10135ES60

(100 U)

10135ES76

(500 U)

10135ES80

(1000 U)

10135-A

Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase(2 U/μL)

5 μL

50 μL

250 μL

2×250 μL

10135-B

2×Canace® PCR buffer (含Mg2+,dNTPs)

300 μL

3×1 mL

15×1 mL

30×1 mL


产品应用

基因克隆;复杂DNA模板扩增;高通量建库。


活性定义

用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74℃,30 min内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。


质量控制

核酸外切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和1 μg λDNA –Hind III,37℃下孵育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

核酸内切酶残留检测:20 μL反应体系,10 U本品和1 μg λDNA,37℃温育4 h,DNA的电泳谱带无变化。

大肠杆菌残留DNA检测:50 μL体系中,加入2 U本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。


运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。


注意事项

为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。


PCR反应体系(推荐冰上配制)

组分

体积

终浓度

 ddH2O

to 50 μL

-

Canace® PCR buffer (含Mg2+,dNTPs)

25 μL

DNA模板 

适量

-

Primer正向 (10 μM)

2.5 μL

0.5 μM

Primer反向 (10 μM)

2.5 μL

0.5 μM

Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase (2 U/μL)

0.5 μL

1 U/50 μL

注:

1)试剂使用:使用前要充分解冻混匀。

2)聚合酶浓度:推荐使用1 U/50 μL。可以在0.5-2 U/50 μL之间进行优化,请勿超过2 U/50 μL。

3)聚合酶添加:为了防止聚合酶因3’→5’外切酶活性降解引物,建议将聚合酶在后一步加到反应体系中。

4)Mg2+终浓度:体系终浓度为1.5 mM。如有特殊需要,可用50 mM MgCl2,以0.2-0.5 mM为间隔向上摸索。

5)高GC模板:在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。

6不同模板的推荐使用量(50 μL反应体系)

模板种类

扩增片段1 kb-20 kb

基因组DNA

50 ng-200 ng

质粒或病毒DNA

10 pg-20 ng

cDNA

1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10)


PCR扩增程序

循环步骤

温度

时间

循环数

预变性

98

0.5-3 min

1

变性

98℃

10 sec

30-35

退火

60℃

20 sec

延伸

72

15-30 sec/kb

终延伸

72℃

5 min

1

注:

1)预变性温度和时间:荐使用98℃。预变性推荐时间:质粒DNA等简单模板为30 sec;cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min;高GC含量模板为5-10 min。

2)退火温度和时间:推荐使用60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的适温度。推荐退火时间设置为20 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

3)延伸温度和时间:推荐使用72℃。延伸时间推荐如下:质粒DNA等简单模板为15 sec/kb;cDNA、基因组DNA等复杂模板为30 sec/kb,根据实际情况可延长至40 sec/kb。

4)扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20℃保存,防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端,产物直接用于克隆,请使用平末端连接载体。


应用实例


1.png 

1: Hieff Canace® 高保真DNA聚合酶扩增2.1 kb-6 kb目的片段。所有基因片段均可实现高特异性、高产量扩增。模板:拟南芥基因组DNA,50 ng/50 μL;退火温度:60℃;延伸时间:30 sec/kb。M:1 kb ladder;1:2.1 kb;2:3.1 kb;3:4.2 kb;4:5 kb;5:6 kb。


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